We use cookies to understand how you use our site and to improve your experience. This includes personalizing content and advertising. To learn more, click here. By continuing to use our site, you accept our use of cookies. Cookie Policy.

Features Partner Sites Information LinkXpress
Sign In
Advertise with Us
GLOBETECH PUBLISHING LLC

Alere

Develops rapid point-of-care diagnostics that focus on infectious disease, cardiology, oncology, drugs of abuse, and ... read more Featured Products: More products

Download Mobile App




Экспресс-анализ выявляет устойчивый к пиразинамиду туберкулез

By Labmedica International staff writers
Posted on 12 Aug 2019
Print article
Alere q - это полностью автоматизированная платформа для тестирования нуклеиновых кислот, которая позволяет использовать молекулярное тестирование для диагностики в любых медицинских условиях (фото любезно предоставлено Alere Technologies).
Alere q - это полностью автоматизированная платформа для тестирования нуклеиновых кислот, которая позволяет использовать молекулярное тестирование для диагностики в любых медицинских условиях (фото любезно предоставлено Alere Technologies).
Туберкулез (ТБ), вызываемый штаммами микобактерии туберкулезного комплекса (Mycobacterium tuberculosis complex - MTBC), остается одним из самых частых инфекционных заболеваний в мире. В связи с высокой частотой и повышенным риском сопутствующей резистентности к другим лекарствам быстрое выявление устойчивости к пиразинамиду (ПЗА) имеет важное значение для борьбы с эпидемией множественной лекарственно-резистентной формы туберкулёза (МЛУ-ТБ).

Пиразинамид является ключевым антибиотиком для лечения лекарственно-чувствительного туберкулеза. Устойчивость к ПЗА в основном опосредуется мутациями в гене pncA; однако нынешний золотой стандарт представляет собой фенотипический тест на чувствительность к лекарственным препаратам, требующий хорошо отрегулированного значения pH для надежных результатов. Тем не менее тестирование на резистентность к ПЗА обычно не проводится.

Группа микробиологов в сотрудничестве с Alere Technologies GmbH (Йена, Германия) использовала 271 клинический изолят MTBC из материала, полученного в результате национального исследования лекарственной устойчивости в Свазиленде, для клинической оценки анализа кривой плавления. Все изоляты были предварительно проанализированы с помощью секвенирования по Сенгеру гена pncA с использованием фланкирующих праймеров из положения от –104 до 560 из 561 кодирующего нуклеотида. Анализ последовательности показал генотип дикого типа для 153 изолятов и различные мутации в анализируемой последовательности pncA для 118 изолятов.

Для тестирования редких мутаций (Ala25Ala, Ser74Ser, Leu116Arg и Asn147Asn) плазмиды с соответствующими последовательностями были получены Eurofins Genomics GmbH (Эберсберг, Германия). Матричные зонды имели C7-амино-линкер для иммобилизации на твердоматричной фазе. Прямые праймеры для анализа кривой плавления были помечены Cy5 на 5'-конце, тогда как обратные праймеры для анализа кривой плавления не имели метки, как и праймеры для анализа TaqMan. Анализ кривой амплификации и плавления проводился в прототипном картридже, производимом Alere Technologies GmbH.

Исследователи сообщили, что анализ кривой плавления обнаруживает генотип не дикого типа в выбранных областях pncA, по крайней мере в 3750 копиях гена/мл в течение 2,5 часов. Эффективность анализа кривой плавления оценивали с 271 клиническим изолятом из Свазиленда. Из 118 изолятов с 21 различной мутацией pncA 98 (83,05%) были обнаружены как генотипы не дикого типа. По сравнению с секвенированием по Сенгеру анализ кривой плавления показал чувствительность 83,05% и специфичность 100%.

Авторы пришли к выводу, что текущий прототипный картридж содержит 57 различных зондов, но его максимальная емкость составляет 88 зондов для анализа с помощью гибридизации на микрочипах. Анализ уже обнаруживает достоверно ДНК MTBC до 3750 копий гена/мл с временем обработки 2,5 часа и работает с геномной ДНК, а также с клеточными лизатами. Тест может быть автоматически выполнен в закрытом картридже с использованием анализатора Alere q с питанием от батареи и может быть применен в условиях ограниченных ресурсов в качестве портативного теста, позволяющего быстро включать ПЗA в схемы лечения на ранних стадиях. Исследование было опубликовано в июньском выпуске журнала “Диагностическая микробиология и инфекционные заболевания” (Diagnostic Microbiology and Infectious Disease).





Print article

Channels

Copyright © 2000-2019 Globetech Media. All rights reserved.