We use cookies to understand how you use our site and to improve your experience. This includes personalizing content and advertising. To learn more, click here. By continuing to use our site, you accept our use of cookies. Cookie Policy.

Features Partner Sites Information LinkXpress
Sign In
Advertise with Us
Abbott Diagnostics

Download Mobile App




Для диагностики болезни Шагаса улучшена техника выделения ДНК

By LabMedica International staff writers
Posted on 13 Feb 2019
Print article
Trypanosoma cruzi в тонких мазках крови, окрашенных по Гимзе (фото любезно предоставлено Центрами по контролю и профилактике заболеваний).
Trypanosoma cruzi в тонких мазках крови, окрашенных по Гимзе (фото любезно предоставлено Центрами по контролю и профилактике заболеваний).
Болезнь Шагаса, вызываемая простейшим паразитом Trypanosoma cruzi, является эндемической во многих частях Северной и Южной Америки, где ей инфицировано от шести до семи миллионов человек. В острой фазе инфекции серологические реакции все еще могут быть отрицательными, но положительными на паразита при микроскопическом исследовании или при культивировании в специализированной среде.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) стала немаловажным и чувствительным диагностическим инструментом. Тест очень чувствителен для диагностики острой и врожденной формы болезни Шагаса. Обычная ПЦР имеет несколько недостатков, в первую очередь риск перекрестной контаминации. По этой причине в настоящее время более широко используется количественная ПЦР (кПЦР).

Ученые из Университета Каэтано Эредиа (Cayetano Heredia University, Лима, Перу) и их коллеги усовершенствовали и разработали более чувствительный метод извлечения ДНК паразита из образца сгустка крови для диагностики болезни Шагаса. Всего было проанализировано 265 парных образцов цельной крови с применением гуанидина (GEB) и образцов сгустка; 150 были взяты у серопозитивных пациентов с болезнью Шагаса. ДНК выделяли как из образцов цельной крови с гуанидином, используя ранее стандартизированную методологию, так и из образцов сгустка, используя недавно разработанную методологию, основанную на комбинировании метода FastPrep и стандартного метода экстракции GEB.

Образцы крови, смешанные с гуанидином/ЭДТА (GEB), подготавливали с использованием набора для матриц ПЦР High Pure PCR Template Preparation kit. Была выполнена дуплексная кПЦР, направленная на сателлитную последовательность ядерного генома T. cruzi и последовательность внутреннего контроля амплификации. Диагноз болезни Шагаса в образцах человека был основан на серологических исследованиях. Ферментно-связанные иммуносорбентные анализы (ELISA) проводились с использованием Chagatek Wiener Recombinante v3.0 ELISA. Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) была проведена с использованием набора Chagas Polychaco. Также был выполнен вестерн-блоттинг.

Команда сообщила, что из 265 проанализированных образцов 150 были взяты у серопозитивных пациентов с болезнью Шагаса. Средняя концентрация ДНК в образцах сгустка была выше, чем в GEB-образцах. Из 150 образцов от Шагас-положительных индивидуумов по результатам серологии 47 образцов дали положительный результат при помощи кПЦР с ДНК, выделенной как с помощью GEB, так и сгустка крови, но дополнительные 13 образцов дали положительный результат только по ДНК, выделенной из сгустка. Серологически отрицательные образцы не дали положительных результатов при тестировании с помощью кПЦР. Согласованность между кПЦР с использованием ДНК из сгустка и ДНК ГЭБ составила 95,9%.

Авторы пришли к выводу, что их усовершенствованная методология обнаружения ДНК T. cruzi с использованием сгустка крови может улучшить раннюю диагностику и, следовательно, позволит оптимизировать лечение и прогноз для инфицированных людей, особенно с малой плотностью паразитов, присутствующих в крови. Исследование было опубликовано 11 января 2019 года в журнале PLOS Neglected Tropical Diseases.

Ссылки по теме:
Cayetano Heredia University


Print article

Channels

Microbiology

view channel
Image: Stenotrophomonas maltophilia colonies on sheep blood agar. Cultivation 48 hours in an aerobic atmosphere, 37 °C (Photo courtesy of microbiologyinpictures).

Global Spread of the Multi-Resistant Pathogen Stenotrophomonas Maltophilia Revealed

Stenotrophomonas maltophilia strains occur in several natural and human associated ecosystems. The bacterium was long regarded as relatively unproblematic, but is now considered to be one of the most feared... Read more
Copyright © 2000-2020 Globetech Media. All rights reserved.