We use cookies to understand how you use our site and to improve your experience. This includes personalizing content and advertising. To learn more, click here. By continuing to use our site, you accept our use of cookies. Cookie Policy.

Features Partner Sites Information LinkXpress
Sign In
Advertise with Us
Eurofins Technologies

Download Mobile App




Метод агглютинации-ПЦР обеспечивает возможность сверхчувствительного обнаружения антител

By LabMedica International staff writers
Posted on 31 May 2016
Print article
Схематическое изображение сверхчувствительного метода для обнаружения антител в жидкой фазе методом агглютинации – полимеразной цепной реакции (ADAP) (фото любезно предоставлено Калифорнийским университетом, г. Беркли).
Схематическое изображение сверхчувствительного метода для обнаружения антител в жидкой фазе методом агглютинации – полимеразной цепной реакции (ADAP) (фото любезно предоставлено Калифорнийским университетом, г. Беркли).
Система обнаружения iQ5, использующая полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени (фото любезно предоставлено компанией Bio-Rad).
Система обнаружения iQ5, использующая полимеразную цепную реакцию в режиме реального времени (фото любезно предоставлено компанией Bio-Rad).
Антитела представляют собой широко используемые биомаркеры для диагностики многих заболевай, и анализы, основанные на иммобилизации антигена на твердой фазе, включают большинство клинических платформ для обнаружения антител, но их проведение может оказаться невозможным в результате денатурации антигена и маскирования антигенной детерминанты.

Эти технические препятствия особенно представляют трудности при обнаружении антител, которые связывают нелинейные или конформационные антигенные детерминанты, такие как антиинсулиновые антитела у больных сахарным диабетом 1 типа и антитела к тиреоглобулину, связанные со злокачественными опухолями щитовидной железы.

Ученые из Калифорнийского университета в г. Беркли (штат Калифорния, США) и их коллеги разработали сверхчувствительный метод для обнаружения антител в жидкой фазе, названный обнаружением антител методом агглютинации – полимеразной цепной реакции (англ. antibody detection by agglutination-polymerase chain reaction, или ADAP). Антитела связываются и агглютинируют с конъюгатами искусственного антигена и ДНК, обеспечивая возможность лигирования нитей ДНК и последующее количественное определение с помощью количественной ПЦР. Прежние примеры использования близкого лигирования разделяют стандартный формат применения ДНК-конъюгированных антител, чтобы обнаружить интересующий определяемый компонент. Метод ADAP меняет ситуацию, используя ДНК-конъюгированный антиген для обнаружения антител.

Анализ использует свойственную антителам поливалентность, чтобы добиться эффекта непосредственной приближенности. Впечатляющий динамический диапазон метода ADAP, по всей видимости, связан со способностью антител привлекать антигены, и это дает основание предполагать, что поликлональные антитела превосходят по своим свойствам моноклональные. Этот механизм уникален для обнаружения антитела и для метода ADAP, и количественная ПЦР была выполнена как на системе обнаружения Bio-Rad CFX96, так и на Bio-Rad iQ5, использующих ПЦР в режиме реального времени (Bio-Rad Laboratories, Inc., Геркулес, штат Калифорния, США). Метод требует всего лишь незначительного количества образца крови пациента и является в 1,000 раз более чувствительным при обнаружении биомаркеров для рака щитовидной железы, чем используемый в настоящее время тест, одобренный государственными органами.

Авторы пришли к заключению, что метод ADAP открывает возможность выполнения всех трех типов тестов (полученных из генома нуклеиновых кислот, антигенов и антител) на объединенной платформе. Метод ADAP также может быть легко адаптирован к всевозможным новым ПЦР-платформам, предназначенным для тестирования на месте оказания медицинской помощи, чтобы обеспечить выполнение высокочувствительных анализов на антитела в жидкой фазе в условиях ограниченных ресурсов. На основании положительных качеств метода, функциональной простоты и эффективного использования имеющейся технологии прогнозируется, что метод ADAP обеспечит полезную аналитическую платформу для большого числа применений в медицинской практике и в научных исследованиях. Исследование было опубликовано 16 февраля 2016 года в журнале ACS Central Science.

Ссылки по теме:
University of California, Berkeley
Bio-Rad Laboratories Inc.



Print article

Channels

Microbiology

view channel
Image: Stenotrophomonas maltophilia colonies on sheep blood agar. Cultivation 48 hours in an aerobic atmosphere, 37 °C (Photo courtesy of microbiologyinpictures).

Global Spread of the Multi-Resistant Pathogen Stenotrophomonas Maltophilia Revealed

Stenotrophomonas maltophilia strains occur in several natural and human associated ecosystems. The bacterium was long regarded as relatively unproblematic, but is now considered to be one of the most feared... Read more
Copyright © 2000-2020 Globetech Media. All rights reserved.