We use cookies to understand how you use our site and to improve your experience. This includes personalizing content and advertising. To learn more, click here. By continuing to use our site, you accept our use of cookies. Cookie Policy.

Features Partner Sites Information LinkXpress
Sign In
Advertise with Us
GLOBETECH PUBLISHING LLC

Download Mobile App




Метод MALDI-TOF MS идентифицирует оомицет, вызывающий питиоз

By Labmedica International staff writers
Posted on 13 Dec 2018
Print article
Масс-спектрометр UltrafleXtreme MALDI-TOF/TOF (фото предоставлено Bruker Daltonics).
Масс-спектрометр UltrafleXtreme MALDI-TOF/TOF (фото предоставлено Bruker Daltonics).
Питиоз является инвазивным, трудно поддающимся лечению и опасным для жизни инфекционным заболеванием, вызываемым Pythium insidiosum, членом уникальной группы грибоподобных микроорганизмов – оомицетов. О случаях заболевания питиозом во всем мире сообщается всё чаще.
В последнее десятилетие времяпролетная масс-спектрометрия с матрично-активированной лазерной десорбцией/ионизацией (MALDI-TOF MS) стала новым мощным диагностическим инструментом, облегчающим клиническую идентификацию многих патогенных микроорганизмов, включая бактерии и грибы.

Ученые из Университета Махидола (Бангкок, Таиланд) выделили в общей сложности 13 штаммов P. Insidiosum от образцов, полученных от 8 человек и 5 животных с питиозом из разных географических мест. Все организмы выдерживали на декстрозном агаре Сабуро при 25 °С. Несколько небольших порций колонии каждого организма были перенесены в 50-миллилитровую колбу, содержащую 10 мл бульона Сабуро с декстрозой, и инкубировались при 37 °С в течение одной недели перед сбором грибкового материала для экстракции белка.

Извлеченный из собранных организмов белок был нанесен на чистую матовую стальную пластину-мишень в 40 копиях (для создания базы данных MS MALDI-TOF для P. insidiosum) или в 5 копиях (для оценки MALDI-TOF MS при идентификации P. insidiosum) и высушен на воздухе при комнатной температуре перед обработкой. После сушки матричного раствора при комнатной температуре образец был немедленно проанализирован с использованием масс-спектрометра Bruker ultrafleXtreme. Матрицы геномной ДНК (gDNA) были извлечены из организмов и подвергнуты мультиплексной полимеразной цепной реакции для определения однонуклеотидного полиморфизма. (PCR).

Команда сообщила, что метод MALDI-TOF MS точно идентифицировал все 13 протестированных штаммов P. insidiosum на уровне видов. Масс-спектры P. insidiosum не соответствовали никаким другим микроорганизмам, включая грибы (т.е. виды Aspergillus, Fusarium и виды грибов класса Zygomycetes), которые имеют сходную микроскопическую морфологию с этим оомицетом. Методы биотипирования на основе MALDI-TOF MS и рДНК последовательно разделили P. insidiosum на три группы: Clade-I (американские штаммы), II (азиатские и австралийские штаммы) и III (в основном тайские штаммы).

Авторы пришли к выводу, что метод MALDI-TOF MS был успешно использован для идентификации и биотипирования P. insidiosum. Полученная база масс-спектральных данных позволит клиническим микробиологическим лабораториям, которые в достаточной мере оборудованы масс-спектрометрами MALDI-TOF, надежно идентифицировать P. Insidiosum без каких-либо специфических для патогена реагентов (антигенов, антител или праймеров). Исследование было опубликовано в декабрьском выпуске International Journal of Infectious Diseases за 2018 год.

Ссылки по теме:
Mahidol University


Print article

Channels

Copyright © 2000-2019 Globetech Media. All rights reserved.