We use cookies to understand how you use our site and to improve your experience. This includes personalizing content and advertising. To learn more, click here. By continuing to use our site, you accept our use of cookies. Cookie Policy.

Features Partner Sites Information LinkXpress
Sign In
Advertise with Us
GLOBETECH PUBLISHING LLC

Download Mobile App




Времяпролётная масс-спектрометрия с лазерной ионизацией и десорбцией из жидкой матрицы поможет идентифицировать питиоз

By Labmedica International staff writers
Posted on 17 Oct 2018
Print article
Времяпролётный масс-спектрометр с лазерной ионизацией и десорбцией из жидкой матрицы (фото любезно предоставлено Bruker Daltonics).
Времяпролётный масс-спектрометр с лазерной ионизацией и десорбцией из жидкой матрицы (фото любезно предоставлено Bruker Daltonics).
Питиоз - опасное для жизни инфекционное заболевание, вызываемое оомицетом Pythium insidiosum. Болезнь все чаще регистрируется во всем мире, и большинство пациентов с питиозом подвергаются хирургическому удалению инфицированного органа.

В последнее десятилетие появился новый мощный диагностический инструмент для упрощения клинической идентификации многих патогенных микроорганизмов, включая бактерии и грибы, – времяпролётная масс-спектрометрия с лазерной ионизацией и десорбцией из жидкой матрицы (matrix-assisted laser desorption ionization–time of flight mass spectrometry - MALDI-TOF MS).

Ученые из Университета Махидола (Mahidol University; Бангкок, Таиланд) выделили в общей сложности 13 штаммов P. insidiosum от восьми человек и пяти животных с питиозом из разных географических местоположений; полученные штаммы были разделены на две группы. Все организмы поддерживались на сабуро-декстрозном агаре при 25 °С. Несколько небольших частей колонии каждого организма были перенесены в 50-миллилитровую колбу, содержащую 10 мл сабуро-декстрозного бульона, и инкубированы при 37 °С в течение одной недели, прежде чем грибковый материал для экстракции белка был собран.

Белок извлекался из организмов и экстрагированный белоксодержащий супернатант наносился на чистую пластину из шлифованной стали в 40 копиях (для получения базы данных MALDI-TOF MS P. insidiosum) или 5 копиях (для оценки MALDI-TOF MS на идентификацию P. insidiosum), после он был просушен на воздухе при комнатной температуре и покрыт 0,5 мкл матричного раствора. Шаблоны геномной ДНК (gDNA) экстрагировались из организмов и подвергались мультиплексной полимеразной цепной реакции (ПЦР) на основе точечного нуклеотидного полиморфизма.

Ученые сообщили, что MALDI-TOF MS точно идентифицировала все 13 штаммов P. insidiosum, проверенные на уровне видов. Масс-спектры P. insidiosum не соответствовали каким-либо другим микроорганизмам, включая грибы (то есть виды Aspergillus, виды Fusarium и грибковые виды класса Zygomycetes), которые имеют сходные микроскопические морфологии с этим оомицетом. Методы биотипирования на основе секвенирования MALDI-TOF MS и rDNA согласованно классифицировали P. insidiosum на три группы: Clade-I (американские штаммы), II (азиатские и австралийские штаммы) и III (в основном тайские штаммы).

Авторы пришли к выводу, что MALDI-TOF MS была успешно использована для идентификации и биотипирования P. insidiosum. Полученная база масс-спектров позволяет клиническим микробиологическим лабораториям, хорошо оснащенным масс-спектрометром MALDI-TOF, удобно идентифицировать P. insidiosum, не требуя каких-либо патоген-специфических реагентов (т.е. антигены, антитела или праймеры). Исследование было опубликовано 6 сентября 2018 года в Международном журнале инфекционных заболеваний (International Journal of Infectious Diseases).

Ссылки по теме:
Университет Махидола


Print article

Channels

Copyright © 2000-2019 Globetech Media. All rights reserved.