We use cookies to understand how you use our site and to improve your experience. This includes personalizing content and advertising. To learn more, click here. By continuing to use our site, you accept our use of cookies. Cookie Policy.

Features Partner Sites Information LinkXpress
Sign In
Advertise with Us
Abbott Diagnostics

Download Mobile App




Изотермическая амплификация с формированием петель идентифицирует виды малярии

By LabMedica International staff writers
Posted on 03 Sep 2018
Print article
Схема протокола для in situ LAMP для эритроцитов, инфицированных плазмодием, на гидрофильных пластинах из циклоолефинового сополимера (фото любезно предоставлено Национальным институтом прогрессивной промышленной науки и технологии).
Схема протокола для in situ LAMP для эритроцитов, инфицированных плазмодием, на гидрофильных пластинах из циклоолефинового сополимера (фото любезно предоставлено Национальным институтом прогрессивной промышленной науки и технологии).
Малярия - инфекционное заболевание, вызываемое различными видами плазмодия, пять из которых заражают людей. Поскольку малярия, вызванная P. falciparum, является наиболее серьезной и характеризуется высокой смертностью, точный и быстрый диагноз особенно важен для эффективного лечения.

Нынешний золотой стандарт для диагностики малярии - это микроскопическое исследование окрашенных по Гимзе мазков крови. Поскольку виды паразитов идентифицируются микроскопистами, которые вручную ищут зараженные паразитом эритроциты, в случае низкой паразитемии или смешанной инфекции может иметь место неверная диагностика из-за человеческой ошибки.

Ученые из Национального института прогрессивной промышленной науки и технологии (National institute of advanced industrial science and technology; Takamatsu, Япония) проводили in situ изотермическую амплификацию с формированием петель (Loop-Mediated Isothermal Amplification - LAMP) в инфицированных эритроцитах (iRBC) на обработанных гидрофильных пластинках, чтобы анализировать как можно больше iRBC на стекле. Идентификация малярийного паразита на клеточных уровнях с использованием in situ LAMP-анализа была завершена. Команда использовала свежие эритроциты здорового донора с типом крови O, которые были инфицированы P. falciparum, содержащим более 60% паразитов в кольцевой стадии, более 20% - в стадии позднего трофозоита и менее 20% - в стадии шизонта.

Суспензии эритроцитов, включающие культивированный Plasmodium falciparum, штамм 3D7, инфицированные эритроциты, диспергировали на поверхностях пластин из циклоолефинового сополимера (ЦОС), которые подвергались гидрофильной обработке реактивным ионным травлением с использованием системы SAMCO RIE (гидрофильная обработка), а затем оставались в покое в течение 10 минут, чтобы эритроциты распределились на поверхности пластины. В процессе промывки пластины средой RPMI 1640 монослои эритроцитов формировались почти на всей поверхности пластины. Затем пластина была высушена феном. Эритроциты фиксировались формалином с последующей пермеабилизацией при помощи Triton X-100. После этого была проведена амплификация рРНК гена P. falciparum с помощью реакции LAMP с дезоксиуридинтрифосфатом, меченным дигоксигенином (DIG) и конкретным набором праймеров. В результате возможно обнаружение инфицированных эритроцитов в виде флуоресцентно-позитивных клеток с анти-DIG-антителами, конъюгированными с флуоресцеином с использованием флуоресцентной микроскопии.

Авторы пришли к выводу, что их исследование показало потенциал in situ LAMP для идентификации видов плазмодия на уровне одиночных клеток на обработанных гидрофильных пластинах из циклоолефинового сополимера, что позволяет проводить высокочувствительный и точный диагноз малярии. Полученные результаты улучшат эффективность метода золотого стандарта для диагностики малярии. Исследование было опубликовано 19 июня 2018 года в журнале Malaria Journal.

Ссылки по теме:
Национальный институт прогрессивной промышленной науки и технологии


Print article

Channels

Copyright © 2000-2020 Globetech Media. All rights reserved.